常規兔源多克隆抗體定制服務常規小鼠源多克隆抗體定制服務常規大鼠源多克隆抗體定制服務常規雞源多克隆抗體制備服務快速抗體制備服務多克隆抗體制備服務小鼠源單克隆抗體定制服務大鼠源單克隆抗體定制服務倉鼠源單克隆抗體定制服務兔子單克隆抗體制備雞單克隆抗體制備猴子單克隆抗體制備犬單克隆抗體制備單克隆抗體/雜交瘤細胞定制服務免疫組化保證性抗體制備轉錄后特殊修飾結構識別抗體制備抗專一亞型抗體制備配體模擬激活性抗體制備捕獲\報告配對抗體制備功能阻遏\專一型抗抗體制備特殊功能抗體制備服務膜蛋白抗體制備服務半抗原抗體制備服務脂質體免疫抗體制備服務自體抗原抗體制備服務特殊性質抗原抗體制備服務基于全細胞抗原呈遞的抗體制備方案基于傳統單克隆抗體制備方案G蛋白偶聯受體抗體制備服務抗離子通道蛋白抗體制備服務抗膜蛋白抗體制備專題噬菌體展示文庫構建工程化骨架蛋白文庫構建限制性多肽文庫構建噬菌體展示文庫篩選內化抗體篩選熱穩定性scFv/Fab篩選蛋白酶底物篩選單域抗體庫構建全人源單抗制備噬菌體展示和抗體文庫服務雙特異性納米抗體制備單域(納米)抗體庫構建納米抗體親和力成熟服務人源/人源化納米抗體制備DNA免疫技術制備膜蛋白納米抗體抗血腦屏障納米抗體制備納米抗體服務細菌展示服務核糖體展示服務酵母展示服務體外展示&其他服務酵母雙雜交篩選服務哺乳動物細胞雙雜交服務胞內抗體制備服務雙雜交服務原位雜交ISH熒光原位雜交FISH原位雜交服務X-射線晶體學通過肽庫方法通過LC-MS法通過三維電鏡方法基于生物信息學預測單克隆抗體表位作圖抗體測序服務表面等離子共振服務(SPR)等溫滴定量熱法服務(ITC)雙偏振極化干涉測量服務(DPI)差示掃描量熱法服務(DSC)免疫原性評價抗體親和力檢測抗體鑒定抗體分析服務二價和雙特異性scFv/Fab服務嵌合抗原受體(CAR)構建服務嵌合IgG構建scFV/Fab構建雙可變區免疫球蛋白制備服務定制半胱氨酸改型抗體超長CDR3s牛抗體制備非猴抗體的硅烷化抗體穩定性改進抗體親和力成熟抗體人源化服務抗體經典化服務人源抗體駱駝化服務人源抗體初始化服務抗體工程服務雙特異性T細胞銜接器(BiTE)Fab-scFv融合蛋白KNODBS-INTO-HOLE技術雜交瘤細胞系雙特異性抗體抗體和蛋白標記抗體生物素化Fab PEG化抗體偶聯藥物納米金標記抗體糖納米粒標記抗體標記服務酶和蛋白定向進化突變庫構建服務蛋白工程服務抗體人源化親和力成熟人源化牛超長CDR3抗體服務人源化納米抗體制備人源化猴單抗制備人源/人源化抗體服務蛋白/抗體偶聯服務生物素化服務寡聚糖生物偶聯寡核苷酸生物偶聯表面錨定服務脂質體偶聯服務PEG修飾服務合成聚合物修飾生物偶聯服務重組IgG制備scFv/Fab制備雙特異性抗體制備抗體和蛋白純化服務重組抗體制備服務穩定細胞系構建定制細胞裂解液穩定細胞系開發cGMP生產治療性抗體和蛋白生產大規模發酵服務cGMP生產大腸桿菌蛋白表達系統枯草芽孢桿菌表達系統酵母蛋白表達系統昆蟲桿狀病毒表達系統哺乳動物細胞蛋白表達系統富含二硫鍵蛋白的原核表達服務無細胞系統蛋白表達服務Marzf單一蛋白制備服務蛋白表達與純化服務抗體&多肽文庫重組抗體產品雜交瘤細胞系穩定細胞系CAR-T載體抗體定制服務平臺噬菌體展示平臺抗體藥物開發平臺CAR-T平臺蛋白表達與純化平臺大規模發酵服務平臺基因測序平臺
親和力成熟

親和力成熟

副標題

親和力成熟是改善抗體和抗原親和力的過程。異源抗體在人源化的過程中往往伴隨著親和力的下降,體外親合力成熟的過程包含了引入突變和生物淘選的過程。

艾柏森生物擁有豐富的抗體親和力成熟經驗,我們通常以scFV形式進行抗體親和力成熟改造,同時我們也提供單域抗體的親和力成熟服務。通過隨機突變、定位突變等多種突變方式,結合專有人類抗體數據庫、電子建模等技術進行抗體親和力成熟優化。利用整合數據庫中針對特異抗原的篩選技術,艾柏森生物提供的抗體親和力成熟服務可以將scFV抗體的KD提高至10-8-10-9,甚至艾柏森生物曾成功的獲取KD為10-12的scFV抗體。

抗體親和力成熟.1.png

服務流程


抗體親和力成熟.2.png


設計親和力成熟方案

目前主要采用以下幾種方式:點突變(定點突變和隨機誘變)、CDR區重組、鏈替換以及DNA重組等手段。艾柏森生物提供基于抗原-抗體相互作用的結構信息開展體外親和力成熟技術,通過計算機輔助分子模擬確定氨基酸被取代的可能性,預測出氨基酸被取代后產生的結構變化以及如何影響其與靶抗原的結合,并通過噬菌體展示或細胞表面展示技術篩選出具有高親和力的抗體。

1. 設計scFV突變文庫

a. 隨機突變法

一般采用易錯PCR法在整個VH和VL區引入隨機突變。艾柏森生物的專利突變菌株CD-affiTM能大大增加抗體庫基因的多樣性。同時也可以采用鏈替換的方法引入突變。

b. 寡核苷酸定點突變法

當抗體/抗原復合物結構可知或者可以通過計算機技術模擬時采用。

抗體親和力成熟.3.png

2. 建立噬菌體展示突變庫

2.1將全套scFV基因片段連接至pCANTAB5e載體,隨后電轉化大腸桿菌TG1;同時鑒定ScFv基因庫庫容(及基因的插入率)。

2.2將輔助噬菌體M13K07加入到轉入了ScFv抗體基因的,生長至對數生長期的大腸桿菌中進行噬菌粒拯救。

2.3培養過夜后,離心收集上清即獲得噬菌體ScFv抗體庫,并對抗體庫的滴度進行測定。

3. 噬菌體展示突變抗體庫篩選

采用兩種純抗原篩選方式:固相篩選法和液相篩選法經過4輪的淘洗,一般情況下抗體的親和力可以達到10-8以上。流程示意圖見下圖。

抗體親和力成熟.4.png

4. ELISA比較噬菌體展示的人源化scFV和親本鼠scFV的親和力

噬菌體擴增— ELISA檢測—噬菌體DNA提取—噬菌體DNA測序

5. 人源化scFV的ELISA驗證

從以上已測序的結合噬菌體中,挑取5-10株不同序列的噬菌體進行抗體的可溶性表達,并進行ELISA鑒定。

6. 測序

對親和力較好的scFV進行基因測序,排除FR區包含大量非人源序列的突變體。

7. 親和力測定

艾柏森生物采用BIAcore system和ForteBio Octet平臺,能高效、準確的測定抗體的親和力。 ForteBio還可以用于過程中定量分析、抗體篩選以及細胞系優化、抗原表位定位、抗體配對等。挑選3-5株最優克隆,測定抗體和抗原的親和力。

抗體親和力成熟.5.png

8. 構建人源化IgG抗體

將人源化scFV抗體的VH和VL通過基因工程的手段分別插入帶有人Fc片段基因的哺乳動物細胞表達系統中,表達全長抗體,并進行親和力測定。

人源/人源化抗體服務

相關服務:

★ 抗體人源化

★ 人源化牛超長CDR3抗體服務

★ 人源/人源化納米抗體制備

★ 人源化猴單抗制備

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 抗體定制服務平臺

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